L’elettroforesi su gel di agarosio è una tecnica indispensabile per moltissime tesi sperimentali in biologia molecolare, in quanto permette di separare e visualizzare frammenti di DNA in base alle loro dimensioni.
Per eseguire correttamente questa metodica, è necessario innanzitutto estrarre e quantificare con precisione il DNA dal campione biologico, utilizzando kit commerciali o protocolli standardizzati. La purezza e quantità del campione è cruciale per il buon esito della corsa elettroforetica.
Successivamente, si prepara il gel di agarosio alla concentrazione ideale in base alle dimensioni del DNA da separare, scegliendo tra agarosio standard o a basso punto di fusione. La soluzione gelificata viene versata nella cella elettroforetica, evitando la formazione di bolle d’aria.
Prima del caricamento, il DNA deve essere miscelato ad un opportuno tampone di caricamento, in grado di conferire la giusta densità al campione e permetterne l’affondamento nel gel.
I campioni vengono caricati nei pozzetti con un micropipetta, facendo attenzione a non superare la quantità massima di DNA indicata. Inoltre, è buona norma allegare un ladder, un marcatore molecolare contenente frammenti di lunghezza nota.
A questo punto ha inizio la corsa elettroforetica vera e propria, applicando un campo elettrico che permette la migrazione del DNA verso il polo positivo con velocità inversamente proporzionale al peso molecolare. È essenziale impostare correttamente voltaggio e tempi.
Al termine della corsa, per visualizzare le bande di DNA si incorpora nel gel un intercalante fluorescente come il bromuro di etidio, che si lega tra i solchi del doppio filamento. L’acquisizione dell’immagine con raggi UV completa il procedimento.
Ogni singolo passaggio richiede estrema attenzione e precisione. Il rischio di errori che inficiano l’intero esperimento è sempre in agguato, dal dosaggio errato dei reagenti a problemi di contaminazione. Ecco perché il supporto di un esperto può fare la differenza per il buon esito della tesi.
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